Откриване на тъканни структури, антитела, и патогени чрез имуномаркиране е популярен, модерен и точен. Имунофлуоресценцията се отнася до имуномаркиране с приготвена флуоресценция антитела които са направени да светят под UV светлина. При директно откриване на имунофлуоресценция, тестовият субстрат се изследва директно с луминесценция антитела, без първични антитела или изкуствени антигени.
Какво е директно откриване на имунофлуоресценция?
Тумор-специфичните антигени в туморната тъкан могат да бъдат открити директно с имунофлуоресценция. По този начин е възможно да се установи къде в тялото съществува метастази дойде от. Директното откриване на имунофлуоресценция е диагностичен метод, основан на открития в имунологията, имунооцветяването и имунохистохимията. Тук акцентът е върху способността на антителата да се свързват със специфични места в тъканта или върху антигени в серума. Тези места са епитопи. В биохимичната диагностика съществуват изкуствени антитела или миметици (единични: миметични), които позволяват маркирането на тези връзки антитяло-антиген чрез флуоресценция или радиоактивност. Конюгатите с изкуствени антитела всъщност се свързват с епитопите, от една страна, и имат флуоресцентен маркер в случай на имунофлуоресценция, от друга страна. Това е алтернатива на използването на радиоактивни маркери. Особеността на директните имунофлуоресцентни детекции в сравнение с индиректните е, че антитялото, което се свързва с епитопа на антигена в изследвания материал, е в същото време вече конюгат на антитялото с флуоресцентния маркер. Допълнителни антитела за интерпозиция не са необходими за директно откриване. При имунофлуоресценция, флуоресцеин, който свети под UV светлина, и флуоресцеин изотиоцианат (FITC) се използват като багрила за конструиране на конюгати на изкуствени антитела. Доколкото се чете малко сложно, но директните откривания на имунофлуоресценция са стандартни медицински методи лабораторна диагностика за множество различни медицински проблеми. Антителата, съдържащи флуоресцентното багрило, се предлагат готови за продажба.
Функция, ефект и цели
Налични са имунофлуоресцентни директни детектори за тъканни изследвания за оцветяване на специфични структури в тъканите. Но те съществуват и за единични клетки. Тук поточната цитометрия играе голяма роля. И накрая, има имуноанализи, състоящи се от твърда и течна фази. Изследванията на имунофлуоресценцията на тъканите са важни преди всичко в онкологията, т.е. в лечението на рак. Тумор-специфичните антигени в туморната тъкан могат да бъдат открити директно с имунофлуоресценция. Тези изследвания на тъканни проби от тумори често са важни за установяване къде в тялото съществува метастази са дошли от или също за формиране на преценка дали туморът е доброкачествен или злокачествен. Изследването на отделни клетки с директно откриване на имунофлуоресценция се използва за намиране на вирусни антигени, бактериални антигени и други епитопи. Например човек научава дали клетките са заразени от вирус и на какъв етап от инфекциозния цикъл са клетките. FACS (= Флуоресцентно активирано клетъчно сортиране) е високоефективен метод на поточна цитометрия, при който флуоресцентно маркирани клетки се разпределят в различни епруветки в зависимост от вида на оцветяването. Този метод е важен в имунологията, хематология намлява инфекциология. Имунофлуоресцентните имуноанализи позволяват директно откриване на токсини от околната среда, генетично модифицирани организми и някои добавки в храната. В тази експериментална настройка винаги има твърда и течна фаза. Многобройни патогени, Включително СПИН-причиняващ HI вирус, също може да бъде открит директно. Въпреки това, при откриване на инфекциозни и автоимунни заболявания, целта често е да се открият антитела, а не антигени. Това са защитата молекули произведени от собственото тяло имунната система. Тогава такива откривания не са директни открития съгласно дефиницията, представена тук, тъй като флуоресцентните антитела не се свързват директно със собствените антигени на организма, а с антигените на тестовата група. Тези антигени от експерименталната група от своя страна се свързват с ендогенните антитела.Само в специални тестове за откриване и потвърждение са директни имунофлуоресцентни детекции, използвани за често срещани инфекции, например от HI вируси намлява Chlamydia. Има тестове за много други заболявания. В повечето ситуации непрякото откриване на антитела е по-добро за инфекциозни заболявания защото на тялото имунната система има гениална способност да помни предишни инфекции. В други ситуации директното откриване на антигени и непрякото откриване на антитела се допълват взаимно. Последните показват, че инфекция е настъпила и преди, докато първите предоставят по-точна информация за текущия статус на патогенната активност.
Рискове, странични ефекти и опасности
При директното откриване на имунофлуоресценция, както при всяко медицинско откриване, има два риска: Рискът от фалшиво положителен резултат и рискът от фалшиво отрицателен резултат. Фалшиво положителните резултати причиняват психологически дискомфорт и много голям дистрес на пациента. Следователно, допълнителни процедури за тестване се добавят към положителните резултати, особено когато диагнозата води до драстични промени в живота. Опасността от фалшиво отрицателен резултат е, че пациентът не научи навреме за заплахата за собствената си здраве и може би дори за общественото здраве. Ето защо е добре да се направят много изследвания и да се направят голям брой различни директни детектори за имунофлуоресценция, готови за продажба и да се предлагат. Заедно с други директни и индиректни методи за откриване на заболявания и патологии, това повишава точността на диагнозата. Прякото откриване се основава на конюгата на антителата, който от една страна се свързва с епитопите на антигените, а от друга страна също предизвиква флуоресценция едновременно. Следователно такъв продукт се използва само в един тип процедура за изпитване и не се използва за други видове изпитвания. Това е важна, процедурна разлика от непрякото откриване, при което първичните антитела се използват преди флуоресцентните антитела за свързване с епитопи. Следователно конюгатът на антителата е подходящ за различни анализи. Тази процедурна разлика се различава от медицинската разлика между непрякото откриване на антитела и директното откриване на антигени.
